總多糖含量測定試劑盒說明書
分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

貨號：YX-C-ZDT 
規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內容：

試劑一：12mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：無水乙醇，自備。
試劑三：濃硫酸，自備。
標準品：粉劑 10mg×1 支，4℃避光保存。

產(chǎn)品說明：

多糖是生物體中廣泛存在的物質，是一類由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接而成的天然高分子多聚物，它是生物體內重要的生物大分子，是維持生命活動正常運轉的基本物質之一。
利用水提醇沉法提取總多糖，苯酚-硫酸法測定總多糖含量。

自備儀器和用品：

分析天平、分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、比色皿、無水乙醇、濃硫酸、蒸餾水、水浴鍋。

操作步驟：

一、總多糖提取
樣本烘干粉碎，稱取約 0.05g 樣本，加入 1mL 水，充分勻漿。100℃水浴提取 2h（必須蓋緊蓋子防止水分流失），冷卻后 10000g 離心 10min，取上清。吸取 0.2mL 上清，慢慢加入 0.8mL 無水乙醇，混勻后 4℃靜置過夜，10000g 離心 10min，棄上清，沉淀中加入 1mL 水，充分混勻溶解沉淀。
二、測定步驟
1、酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 490nm。
2、稱 1mg 標準品用 1mL 蒸餾水溶解，濃度為 1mg/mL。取適當溶液配制濃度為1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL 的標準品（蒸餾水進行稀釋）。取 1.5mL EP 管吸取 200μL 標準品，加入 100μL 試劑一和 0.5mL 濃硫酸，混勻后 90℃水浴 20min，流水冷卻。取 750μL 加入比色皿，于 490nm 下測定吸光值A。根據(jù)吸光度（x）和濃度（y，mg/mL） 做出標準曲線。
3、吸取 200μL 上清，加入 100μL 試劑一和 0.5mL 濃硫酸，混勻后 90℃水浴 20min，流水冷卻。取 750μL 加入比色皿，于 490nm 下測定吸光值 △A。
三、總多糖含量計算
根據(jù)標準曲線，將樣品△A 帶入公式中（x），計算出樣品濃度 y（mg/mL）。
（1） 按樣本鮮重計算
總多糖（mg /g 干重）=5y÷W
V 樣總：上清液總體積，mL；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；W：樣品質量，g ；樣本體積已被稀釋五倍，T。

注意事項：

1. 如果樣品吸光值A 大于 最大濃度標準品吸光值，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計算公式中再乘以相應稀釋倍數(shù)。
2. 由于濃硫酸具有強腐蝕性，請謹慎操作