作為細胞染色劑之一的二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），簡稱噻唑鹽染料，可以自由地進入活細胞中。細胞繁殖快，其代謝旺盛，線粒體琥珀酸脫氫酶的活性增強，從而還原細胞漿中的淡黃色外源性染料為不溶性、藍紫色結(jié)晶產(chǎn)物而留存在細胞內(nèi)，使用特定有機化物質(zhì)溶解結(jié)晶顆粒而呈現(xiàn)出顏色深淺，在570nm波長下產(chǎn)生吸收峰：吸光值與細胞量成線性正相關(guān)，反映細胞活力。
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO染色液（Reagent A）    毫升
HEPENGBIO溶解液（Reagent B）    毫升
產(chǎn)品說明書                        1份
 
保存方式
 
保存在－20℃冰箱里，避免光照，有效保證6月
 
用戶自備
 
酶標(biāo)儀：用于定量檢測染色細胞
移液排槍：用于同步加入染色試劑
 
實驗步驟
 
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒放在室溫下融化,置于暗室里。然后進行下列操作。
 
一、貼壁細胞檢測
1． 從細胞培養(yǎng)箱里取出待測的96孔細胞培養(yǎng)板
2． 確保96孔板中每一個孔含有100微升細胞培養(yǎng)液
3． 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent A）到96孔板中每一個孔里
4． 放進37℃培養(yǎng)箱里，孵育2小時（可見紫色結(jié)晶沉淀）
5． 小心抽去每孔中含有HEPENGBIO染色液（Reagent A）的培養(yǎng)液（注意：確保培養(yǎng)孔中無任何液體殘留）
6． 小心加入xx微升HEPENGBIO溶解液（Reagent B）到96孔板中每一個孔里
7． 放進37℃培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘
8． 輕輕搖動96孔板，使其混勻
9． 即刻放進酶標(biāo)儀測讀：波長570nm
10． 繪制細胞生長曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標(biāo)（X軸）為細胞數(shù)
 
一、 懸浮細胞檢測
1． 從細胞培養(yǎng)箱里取出待測的96孔細胞培養(yǎng)板
2． 確保96孔板中每一個孔含有100微升細胞培養(yǎng)液
3． 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent A）到96孔板中每一個孔里
4． 放進37℃培養(yǎng)箱里，孵育4小時（可見紫色結(jié)晶沉淀）
5． 放進孔板離心機離心10分鐘，速度為300g
6． 小心抽去每孔中含有HEPENGBIO染色液（Reagent A）的培養(yǎng)液（注意：確保培養(yǎng)孔中無任何液體殘留）
7． 小心加入xx微升HEPENGBIO溶解液（Reagent B）到96孔板中每一個孔里
8． 放進37℃培養(yǎng)箱里，孵育1小時
9． 輕輕搖動96孔板，使其混勻
10． 即刻放進酶標(biāo)儀測讀：波長570nm
11． 繪制細胞生長曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標(biāo)（X軸）為細胞數(shù)