二價(jià)鐵（ferrous）是氧化數(shù)為二的鐵。二價(jià)鐵溶解性好，生物學(xué)效價(jià)優(yōu)于三價(jià)鐵，因此鐵首先應(yīng)被還原為二價(jià)鐵，才容易被生物體吸收利用。動(dòng)物和人體的整個(gè)消化道都可以吸收，植物在根尖處吸收。機(jī)體大約有三分之二的鐵存在于紅細(xì)胞的血紅蛋白和肌肉的肌紅蛋白中，20％的鐵以不同形式存在于肝、脾和其他組織中。鐵作為氧的載體，保證組織內(nèi)氧的正常輸送，在細(xì)胞生物氧化和能量代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。 通過(guò)酸性氰正鐵酸鹽（ferricyanide）與組織中二價(jià)正鐵離子（ferrous ion）結(jié)合，成為鐵氰亞鐵（ferrous ferricyanide），而呈現(xiàn)不溶性亮藍(lán)色色素，又稱(chēng)為特恩布爾藍(lán)或騰氏藍(lán)（turnbull blue）。其反應(yīng)原理如下：
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO去石蠟液（Reagent A）       毫升
HEPENGBIO補(bǔ)水液A（Reagent B）  毫升
HEPENGBIO補(bǔ)水液B（Reagent C）  毫升
HEPENGBIO補(bǔ)水液C（Reagent D）  毫升
HEPENGBIO補(bǔ)水液D（Reagent E）  毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent F）  毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent G）  毫升
HEPENGBIO酸性液（Reagent H）  毫升
HEPENGBIO飽和液（Reagent I）  毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)  1份
 
保存方式
 
保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO染色液（Reagent G），避免光照；HEPENGBIO染色液（Reagent G）和HEPENGBIO酸性液（Reagent H）具有腐蝕性和毒性，注意操作安全；有效保證6月
 
 
 
用戶(hù)自備
 
2毫升離心管：用于染色工作液配制的容器
核固紅復(fù)染試劑盒（HEPENGBIO40011）：用于常規(guī)染色后復(fù)染
小型染色缸：用于石蠟切片的去石蠟和染色操作
光學(xué)顯微鏡：用于組織細(xì)胞染色后觀察分析
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
一、 去石蠟處理
 
1． 取出10片待測(cè)的石蠟包埋的5微米厚的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，此步很重要）
2． 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
3． 室溫下靜置15分鐘
4． 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

染色缸	孵育時(shí)間
xx毫升HEPENGBIO去石蠟液（Reagent A）	15分鐘
xx毫升HEPENGBIO去石蠟液（Reagent A）	15分鐘
xx毫升HEPENGBIO去石蠟液（Reagent A）	15分鐘
xx毫升HEPENGBIO補(bǔ)水液A（Reagent B）	3分鐘
xx毫升HEPENGBIO補(bǔ)水液B（Reagent C）	3分鐘
xx毫升HEPENGBIO補(bǔ)水液C（Reagent D）	3分鐘
xx毫升HEPENGBIO補(bǔ)水液D（Reagent E）	3分鐘

 
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO補(bǔ)水液D（Reagent E）
6． 小心加上x(chóng)微升HEPENGBIO清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
7． 室溫下孵育5分鐘
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F） 
二、 樣本染色處理
操作開(kāi)始前，將4℃冰箱里的試劑盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent G）和HEPENGBIO酸性液（Reagent H）置于室溫下，分別移出1毫升到2.2毫升離心管，混勻后，標(biāo)記為HEPENGBIO染色工作液，用錫箔紙包裹，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。
1． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO染色工作液，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
2． 室溫下孵育60分鐘；或直至可見(jiàn)籃色
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色工作液
4． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO飽和液（Reagent I），清洗樣品表面
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO飽和液（Reagent I） 
 
三、 樣本復(fù)染處理
 
1． （選擇步驟）樣本復(fù)染處理（核固紅）
2． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO補(bǔ)水液B（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO補(bǔ)水液B（Reagent C）
4． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO補(bǔ)水液A（Reagent B）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO補(bǔ)水液A（Reagent B）
6． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO去石蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
7． 小心移去切片上的HEPENGBIO去石蠟液（Reagent A）
8． 放上蓋玻片或封片
9． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：二價(jià)鐵沉積陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)亮藍(lán)色（如果復(fù)染：細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)粉紅色，細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色）