高爾基體（Golgi apparatus或Golgi body），又稱為高爾基復(fù)合體（Golgi complex），是大多數(shù)真核細(xì)胞的細(xì)胞器組分，由40至100扁平片層或稱為小池（cisternae）堆疊成內(nèi)膜系統(tǒng)（endomembrane system），分成正側(cè)或內(nèi)側(cè)網(wǎng)絡(luò)（cis-Golgi network）、近內(nèi)中間網(wǎng)絡(luò)（medial-Golgi）、內(nèi)腔網(wǎng)絡(luò)（endo-Golgi）、外側(cè)或反側(cè)網(wǎng)絡(luò)等（trans-Golgi）細(xì)胞內(nèi)小管（tubules）、囊泡（vesicles）和小池（cisternae/sac）相互連接的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，其主要功能在于由內(nèi)側(cè)網(wǎng)絡(luò)接受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊泡中的蛋白質(zhì)和脂類等生物大分子，處理（修飾、分類）和組裝后，由外側(cè)網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)運(yùn)分泌到目標(biāo)位置。同時(shí)也是合成蛋白聚糖（proteoglycan）和碳水化合物的重要場(chǎng)所。高爾基體的分離是現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究的常用手段之一：第一，通過(guò)機(jī)械或化學(xué)方法破裂組織細(xì)胞；第二，通過(guò)低速差速離心去除殘?jiān)樾己途薮蠹?xì)胞器；第三，可以通過(guò)等密度離心獲得高爾基體。 
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）   毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B）   毫升
HEPENGBIO分離液A（Reagent C）   毫升
HEPENGBIO分離液B（Reagent D）   毫升
HEPENGBIO保存液（Reagent E）   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書   1份
 
保存方式
 
保存在4℃冰箱里，有效保證6月
 
用戶自備
 
HANK平衡鹽緩沖溶液（HEPENGBIO12028）或PBS緩沖溶液（HEPENGBIO12033）：用于清理細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于細(xì)胞脫離
完全細(xì)胞培養(yǎng)液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的細(xì)胞培養(yǎng)基
15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器
1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器
8毫升超速離心管：用于超高速離心的容器
4℃（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品制備
4℃超速離心機(jī)：用于樣品制備
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織
平式搖蕩儀：用于混勻
3號(hào)針筒和18號(hào)針頭：用于收集樣品
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
一、 細(xì)胞樣品
 
1． 準(zhǔn)備5至10瓶75cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶的細(xì)胞（5 X 10⁷），直至細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿整個(gè)培養(yǎng)表面
2． 分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面，然后抽去
3． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2一次
4． 加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)表面
5． 置入37℃培養(yǎng)箱3分種
6． 輕輕手擊震動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落
7． 分別加入10毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液
8． 移入一個(gè)50毫升錐形離心管
9． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為200g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升預(yù)冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞
12． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入預(yù)冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
15． 渦旋震蕩5秒，充分混勻
16． 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
17． 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下）（注意：參見注意事項(xiàng)7）
18． 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
19． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為3000g
20． 小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管——
21． 放進(jìn)－70℃冰箱里備用或放進(jìn)冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
22． 移取xx毫升的HEPENGBIO分離液A（Reagent C）到8毫升超速離心管 
23． 小心加入xx毫升的HEPENGBIO分離液B（Reagent D）在HEPENGBIO分離液A（Reagent C）的上面，避免震動(dòng)
24． 輕輕加入xx毫升上述高爾基體混勻液在HEPENGBIO分離液B（Reagent D）的上面，避免震動(dòng)
25． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心4小時(shí)，速度為100000g
26． 小心取出超速離心管：可見樣品和HEPENGBIO分離液B（Reagent D）交界處棕色或乳黃色樣品帶
27． 小心收集高爾基體樣品帶到8毫升超速離心管（注意：用3毫升針筒和18號(hào)針頭，置于樣品帶下緣小心緩慢抽吸）
28． 加入xx毫升HEPENGBIO保存液（Reagent E）
29． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心30分鐘，速度為100000g
30． 小心抽去上清液
31． 加入xx微升HEPENGBIO保存液（Reagent E），混勻
32． 即刻移入到預(yù)冷的1.5毫升離心管
33． 放進(jìn)－70℃冰箱里保存
 
二、 組織樣品
 
1． 手術(shù)取出動(dòng)物組織，避免或去除脂肪組織，秤重以確定1克組織重量（實(shí)驗(yàn)前最好使動(dòng)物空腹12至24小時(shí)）
2． （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎組織
5． 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
6． 加入預(yù)冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
7． 渦旋震蕩5秒，充分混勻
8． 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
9． 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下）（注意：參見注意事項(xiàng)7）
10． 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
11． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為3000g
12． 小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管——
13． 放進(jìn)－70℃冰箱里備用或放進(jìn)冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
14． 移取xx毫升的HEPENGBIO分離液A（Reagent C）到8毫升超速離心管 
15． 小心加入xx毫升的HEPENGBIO分離液B（Reagent D）在HEPENGBIO分離液A（Reagent C）的上面，避免震動(dòng)
16． 輕輕加入xx毫升上述高爾基體混勻液在HEPENGBIO分離液B（Reagent D）的上面，避免震動(dòng)
17． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心4小時(shí)，速度為100000g
18． 小心取出超速離心管：可見樣品和HEPENGBIO分離液B（Reagent D）交界處棕色或乳黃色樣品帶
19． 小心收集高爾基體樣品帶到8毫升超速離心管（注意：用3毫升針筒和18號(hào)針頭，置于樣品帶下緣小心緩慢抽吸）
20． 加入xx毫升HEPENGBIO保存液（Reagent E）
21． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心30分鐘，速度為100000g
22． 小心抽去上清液
23． 加入xx微升HEPENGBIO保存液（Reagent E），混勻
24． 即刻移入到預(yù)冷的1.5毫升離心管
25． 放進(jìn)－70℃冰箱里保存