.jpg.jpg)
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO固著液A（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固著液B（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO顯色液A（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO顯色液B（Reagent F） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月
用戶自備
30％蔗糖：用于樣品脫水處理
無離子水：用于工作液的配制
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
無菌手術(shù)刀和鑷子：用于解剖動物腦組織
小型玻璃染色缸：用于組織或切片處理的容器
切片機：用于組織切片
明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片
中性樹脂：用于切片封片
光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析
實驗步驟
一、 樣本固著處理
1． 常規(guī)麻醉動物和手術(shù)（建議：使用生理鹽水由心臟處灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清；如果切片易碎，可以使用無離子水快速沖洗組織替代灌注）
2． 即刻小心取出腦組織
3． 用無菌手術(shù)刀將腦組織切成0.5厘米厚的組織塊
4． 即刻用無菌鑷子夾起組織塊
5． 小心轉(zhuǎn)移到含有xx毫升HEPENGBIO固著液A（Reagent A）和xx毫升HEPENGBIO固著液B（Reagent B）的混合液里（20毫升/2塊組織塊）
6． 室溫下浸泡孵育2周，避免光照
7． 小心轉(zhuǎn)移到用戶自備的30％蔗糖溶液里
8． 在4℃溫度下浸泡孵育48小時，或組織沉底，避免光照（注意：不宜超過1周）
9． 用綿紙或濾紙吸干組織塊
10． 放進(jìn)－20℃冰箱里
11． 取出組織塊，在－20℃條件下進(jìn)行包埋后，緩慢冰凍切片，為40至150微米厚，并鋪片在明膠化載玻片上（注意：碎片是常見現(xiàn)象，參考注意事項3和4）
12． 置于－20℃冰箱里保存
二、 樣本染色處理
準(zhǔn)備一個20毫升塑料瓶，加入10毫升用戶自備的無離子水，然后分別加入xx毫升HEPENGBIO顯色液A（Reagent E）和HEPENGBIO顯色液B（Reagent F），混勻，標(biāo)記為HEPENGBIO顯色工作液（有效使用10天），避免光照。然后進(jìn)行下列操作。
1． 取出待測的40至150微米厚的冰凍組織切片
2． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分鐘
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
4． 小心加上xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent D），鋪滿整個切片樣品表面
5． 室溫下孵育30分鐘
6． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分鐘（注意：反復(fù)輕柔攪動，清洗完全）
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
9． 小心加上xx微升HEPENGBIO顯色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
10． 室溫下孵育10至30分鐘，直至呈現(xiàn)黑色，即刻終止，避免光照（注意：期間可以在顯微鏡下觀察）
11． 小心移去切片上的HEPENGBIO顯色工作液
12． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分鐘
13． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
14． （選擇步驟）進(jìn)行復(fù)染操作（建議使用HEPENGBIO甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）復(fù)染試劑盒－HEPENGBIO80052）
15． 透明處理
16． 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
17． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：神經(jīng)元、錐體細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、少突觸膠質(zhì)細(xì)胞（橢圓形如同串珠）和其它突起，呈現(xiàn)黑色（如果復(fù)染――細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，胞漿尼氏（體）物質(zhì)呈現(xiàn)粉紅至紫色）
注意事項
1． 本產(chǎn)品為20次（40塊組織和20次染色）操作
2． 操作時，須戴手套
3． 如果樣品切片時，出現(xiàn)組織碎片，建議：第一，蔗糖處理72小時或直至組織沉底；第二，使用異戊烷快速冷凍組織30秒至1分鐘，后續(xù)包埋后，再行—19℃均衡溫度后切片；如果無法解決，建議使用震動切片或石蠟切片等；第三，使用震動切片前，置于6%蔗糖或加入50微升HEPENGBIO清理液（Reagent C）濕潤后再行切片
4． 快速冷凍切片操作要點：固定處理后，30%蔗糖浸泡，第一個12小時換液一次，繼續(xù)浸泡至72小時，可長達(dá)1周
1） 準(zhǔn)備300毫升異戊烷在干冰里30分鐘，溫度達(dá)到-70℃
2） 將組織放在網(wǎng)架容器，緩慢放進(jìn)異戊烷里30秒至1分鐘。理想狀態(tài)是組織完全冰凍，如果時間過久，組織會碎裂
3） 迅速取出，用預(yù)冷的棉紙去除殘留異戊烷
4） 錫紙包裹，-70儲存或準(zhǔn)備切片
5） 切片機溫度-19℃
6） 組織塊容器置于干冰中，加入包埋液在容器里，包埋液凍住后，放進(jìn)組織塊，再加入少量包埋液在組織塊上
7） 緩慢切片
5． 關(guān)于切片制備，參考論文《臨床和實驗病理學(xué)雜志》2017 Jan 33（1）,113-116頁（王蕾 張芳 湯仁仙 張冠群 牛海晨）
6． 試劑具有腐蝕性，注意操作安全，尤其使用HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 鋪片須使用明膠化載玻片，否則染色會掉片：第一用毛筆涂刷；第二保持濕潤3小時；第三用PARAFIN包裹后壓片
8． 切片建議100至200微米，過厚和過薄不利于檢測神經(jīng)細(xì)胞
9． 建議使用玻璃染色缸
10． 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
11． 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
12． 整個操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
13． 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
14． 樣品染色后保存，避免光照
本公司提供系列組織細(xì)胞神經(jīng)系統(tǒng)成分染色試劑產(chǎn)品
HEPENGBIO固著液A（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固著液B（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO顯色液A（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO顯色液B（Reagent F） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月
用戶自備
30％蔗糖：用于樣品脫水處理
無離子水：用于工作液的配制
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
無菌手術(shù)刀和鑷子：用于解剖動物腦組織
小型玻璃染色缸：用于組織或切片處理的容器
切片機：用于組織切片
明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片
中性樹脂：用于切片封片
光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析
實驗步驟
一、 樣本固著處理
1． 常規(guī)麻醉動物和手術(shù)（建議：使用生理鹽水由心臟處灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清；如果切片易碎，可以使用無離子水快速沖洗組織替代灌注）
2． 即刻小心取出腦組織
3． 用無菌手術(shù)刀將腦組織切成0.5厘米厚的組織塊
4． 即刻用無菌鑷子夾起組織塊
5． 小心轉(zhuǎn)移到含有xx毫升HEPENGBIO固著液A（Reagent A）和xx毫升HEPENGBIO固著液B（Reagent B）的混合液里（20毫升/2塊組織塊）
6． 室溫下浸泡孵育2周，避免光照
7． 小心轉(zhuǎn)移到用戶自備的30％蔗糖溶液里
8． 在4℃溫度下浸泡孵育48小時，或組織沉底，避免光照（注意：不宜超過1周）
9． 用綿紙或濾紙吸干組織塊
10． 放進(jìn)－20℃冰箱里
11． 取出組織塊，在－20℃條件下進(jìn)行包埋后，緩慢冰凍切片，為40至150微米厚，并鋪片在明膠化載玻片上（注意：碎片是常見現(xiàn)象，參考注意事項3和4）
12． 置于－20℃冰箱里保存
二、 樣本染色處理
準(zhǔn)備一個20毫升塑料瓶，加入10毫升用戶自備的無離子水，然后分別加入xx毫升HEPENGBIO顯色液A（Reagent E）和HEPENGBIO顯色液B（Reagent F），混勻，標(biāo)記為HEPENGBIO顯色工作液（有效使用10天），避免光照。然后進(jìn)行下列操作。
1． 取出待測的40至150微米厚的冰凍組織切片
2． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分鐘
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
4． 小心加上xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent D），鋪滿整個切片樣品表面
5． 室溫下孵育30分鐘
6． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分鐘（注意：反復(fù)輕柔攪動，清洗完全）
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
9． 小心加上xx微升HEPENGBIO顯色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
10． 室溫下孵育10至30分鐘，直至呈現(xiàn)黑色，即刻終止，避免光照（注意：期間可以在顯微鏡下觀察）
11． 小心移去切片上的HEPENGBIO顯色工作液
12． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent C）中孵育1分鐘
13． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
14． （選擇步驟）進(jìn)行復(fù)染操作（建議使用HEPENGBIO甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）復(fù)染試劑盒－HEPENGBIO80052）
15． 透明處理
16． 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
17． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：神經(jīng)元、錐體細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、少突觸膠質(zhì)細(xì)胞（橢圓形如同串珠）和其它突起，呈現(xiàn)黑色（如果復(fù)染――細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，胞漿尼氏（體）物質(zhì)呈現(xiàn)粉紅至紫色）
注意事項
1． 本產(chǎn)品為20次（40塊組織和20次染色）操作
2． 操作時，須戴手套
3． 如果樣品切片時，出現(xiàn)組織碎片，建議：第一，蔗糖處理72小時或直至組織沉底；第二，使用異戊烷快速冷凍組織30秒至1分鐘，后續(xù)包埋后，再行—19℃均衡溫度后切片；如果無法解決，建議使用震動切片或石蠟切片等；第三，使用震動切片前，置于6%蔗糖或加入50微升HEPENGBIO清理液（Reagent C）濕潤后再行切片
4． 快速冷凍切片操作要點：固定處理后，30%蔗糖浸泡，第一個12小時換液一次，繼續(xù)浸泡至72小時，可長達(dá)1周
1） 準(zhǔn)備300毫升異戊烷在干冰里30分鐘，溫度達(dá)到-70℃
2） 將組織放在網(wǎng)架容器，緩慢放進(jìn)異戊烷里30秒至1分鐘。理想狀態(tài)是組織完全冰凍，如果時間過久，組織會碎裂
3） 迅速取出，用預(yù)冷的棉紙去除殘留異戊烷
4） 錫紙包裹，-70儲存或準(zhǔn)備切片
5） 切片機溫度-19℃
6） 組織塊容器置于干冰中，加入包埋液在容器里，包埋液凍住后，放進(jìn)組織塊，再加入少量包埋液在組織塊上
7） 緩慢切片
5． 關(guān)于切片制備，參考論文《臨床和實驗病理學(xué)雜志》2017 Jan 33（1）,113-116頁（王蕾 張芳 湯仁仙 張冠群 牛海晨）
6． 試劑具有腐蝕性，注意操作安全，尤其使用HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 鋪片須使用明膠化載玻片，否則染色會掉片：第一用毛筆涂刷；第二保持濕潤3小時；第三用PARAFIN包裹后壓片
8． 切片建議100至200微米，過厚和過薄不利于檢測神經(jīng)細(xì)胞
9． 建議使用玻璃染色缸
10． 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
11． 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
12． 整個操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
13． 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
14． 樣品染色后保存，避免光照
本公司提供系列組織細(xì)胞神經(jīng)系統(tǒng)成分染色試劑產(chǎn)品
