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考馬斯亮藍(lán)染料G-250（Coomassie Brilliant Blue G-250）是一種與蛋白質(zhì)結(jié)合的化學(xué)染料。它的三苯甲烷（triphenylmethane）基團(tuán)，主要與蛋白質(zhì)的非極性結(jié)構(gòu)結(jié)合。而它的陰離子磺酸鹽（anion sulfonate）基團(tuán)與蛋白質(zhì)分子的陽離子和芳香類氨基酸，尤其是精氨酸和賴氨酸側(cè)鏈的結(jié)合。在酸性環(huán)境下，其最大吸收波長從465nm轉(zhuǎn)換為595nm。Bradford提出的方法的最大優(yōu)點(diǎn)在于不受樣品中各種化學(xué)成分的干擾。較之Lowry，Hartree-Lowry和 BCA，更為敏感。
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A），避免光照；有效保證3月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
比色皿或96孔板：用于樣品比色的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、96孔板微量測定
A．建立標(biāo)準(zhǔn)樣品曲線
1．將－20℃冰箱里試劑盒中的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）置入冰槽里融化
2．準(zhǔn)備1個(gè)96孔板，做好相應(yīng)的標(biāo)記
3．按下表配制標(biāo)準(zhǔn)樣品反應(yīng)液
1）分別移取適量的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）到96孔板里指定序號(hào)的樣品孔里
2）分別移取適量的HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C）到96孔板里指定序號(hào)的樣品孔里
3）最后分別加入xx微升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A）
4．輕輕搖動(dòng)96孔板，混勻反應(yīng)物
5．室溫下暗室里孵育5分鐘
6．即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測定：波長為595nm
7．構(gòu)建蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y）為吸光值OD595，橫座標(biāo)（X）為蛋白質(zhì)含量（微克）
B．樣品測定
1． 將待測樣品置入冰槽里融化
2． 分別移取10微升待測樣品到96孔板里指定序號(hào)的樣品孔里
3． 分別加入xx微升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A）
4． 輕輕搖動(dòng)96孔板，混勻反應(yīng)物
5． 室溫下暗室里孵育5分鐘
6． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測定：波長為595nm
7． 根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，測出待測樣品的檢測含量，再除以10微升（樣品量），獲得待測樣品的實(shí)際濃度（微克/微升）（注意：參見注意事項(xiàng)4）
二、比色皿標(biāo)準(zhǔn)測定
A．建立標(biāo)準(zhǔn)樣品曲線
1．將－20℃冰箱里試劑盒中的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）置入冰槽里融化
2．準(zhǔn)備好1毫升比色皿
3．按下表配制標(biāo)準(zhǔn)樣品反應(yīng)液
1）分別移取適量的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）到1毫升比色皿
2）分別加入適量的HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C）
3）最后分別加入xx毫升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A）
4．輕輕上下傾倒比色皿，混勻反應(yīng)物
5．室溫下暗室里孵育5分鐘
6．即刻放進(jìn)分光光度儀測定：波長為595nm
7．繪制蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y）為吸光值OD595，橫座標(biāo)（X）為蛋白質(zhì)含量（微克）
B．樣品測定
1．將待測樣品置入冰槽里融化
2．移取25微升待測樣品到1毫升比色皿里
4．加入xx毫升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A）
5．輕輕上下傾倒比色皿，混勻反應(yīng)物
6．室溫下暗室里孵育5分鐘
7．即刻放進(jìn)分光光度儀測定：波長為595nm
8．根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，測出待測樣品的檢測含量，再除以25微升（樣品量），獲得待測樣品的實(shí)際濃度（微克/微升）（注意：參見注意事項(xiàng)4）
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A），避免光照；有效保證3月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
比色皿或96孔板：用于樣品比色的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、96孔板微量測定
A．建立標(biāo)準(zhǔn)樣品曲線
1．將－20℃冰箱里試劑盒中的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）置入冰槽里融化
2．準(zhǔn)備1個(gè)96孔板，做好相應(yīng)的標(biāo)記
3．按下表配制標(biāo)準(zhǔn)樣品反應(yīng)液
1）分別移取適量的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）到96孔板里指定序號(hào)的樣品孔里
2）分別移取適量的HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C）到96孔板里指定序號(hào)的樣品孔里
3）最后分別加入xx微升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A）
| 序號(hào) | HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B） | HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C） | HEPENGBIO反應(yīng)液(Reagent A) | 標(biāo)準(zhǔn)樣品蛋白質(zhì)含量 （微克） |
| 1 | xx微升 | 0 | xx微升 | 10 |
| 2 | xx微升 | xx微升 | xx微升 | 5 |
| 3 | xx微升 | xx微升 | xx微升 | 2.5 |
| 4 | xx微升 | xx微升 | xx微升 | 1.25 |
| 7 | 0 | xx微升 | xx微升 | 0 |
5．室溫下暗室里孵育5分鐘
6．即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測定：波長為595nm
7．構(gòu)建蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y）為吸光值OD595，橫座標(biāo)（X）為蛋白質(zhì)含量（微克）
B．樣品測定
1． 將待測樣品置入冰槽里融化
2． 分別移取10微升待測樣品到96孔板里指定序號(hào)的樣品孔里
3． 分別加入xx微升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A）
4． 輕輕搖動(dòng)96孔板，混勻反應(yīng)物
5． 室溫下暗室里孵育5分鐘
6． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測定：波長為595nm
7． 根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，測出待測樣品的檢測含量，再除以10微升（樣品量），獲得待測樣品的實(shí)際濃度（微克/微升）（注意：參見注意事項(xiàng)4）
二、比色皿標(biāo)準(zhǔn)測定
A．建立標(biāo)準(zhǔn)樣品曲線
1．將－20℃冰箱里試劑盒中的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）置入冰槽里融化
2．準(zhǔn)備好1毫升比色皿
3．按下表配制標(biāo)準(zhǔn)樣品反應(yīng)液
1）分別移取適量的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B）到1毫升比色皿
2）分別加入適量的HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C）
3）最后分別加入xx毫升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A）
| 序號(hào) | HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent B） | HEPENGBIO補(bǔ)充液（Reagent C） | HEPENGBIO反應(yīng)液 （Reagent A） |
標(biāo)準(zhǔn)樣品蛋白質(zhì)含量 （微克） |
| 1 | xx微升 | 0 | xx毫升 | 25 |
| 2 | xx微升 | xx微升 | xx毫升 | 12.5 |
| 3 | xx微升 | xx微升 | xx毫升 | 6.25 |
| 4 | xx微升 | xx微升 | xx毫升 | 3.125 |
| 5 | 0 | xx微升 | xx毫升 | 0 |
5．室溫下暗室里孵育5分鐘
6．即刻放進(jìn)分光光度儀測定：波長為595nm
7．繪制蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y）為吸光值OD595，橫座標(biāo)（X）為蛋白質(zhì)含量（微克）
B．樣品測定
1．將待測樣品置入冰槽里融化
2．移取25微升待測樣品到1毫升比色皿里
4．加入xx毫升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent A）
5．輕輕上下傾倒比色皿，混勻反應(yīng)物
6．室溫下暗室里孵育5分鐘
7．即刻放進(jìn)分光光度儀測定：波長為595nm
8．根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，測出待測樣品的檢測含量，再除以25微升（樣品量），獲得待測樣品的實(shí)際濃度（微克/微升）（注意：參見注意事項(xiàng)4）
