愛(ài)潑斯坦巴爾病毒（Epstein-Barr virus；EBV），又稱為人類皰疹病毒4（human herpesvirus 4），是Anthony Epstein和Yvonne Barr于1964年首次成功地將丹尼斯伯基特（Danis Burkitt）發(fā)現(xiàn)的非洲兒童淋巴瘤細(xì)胞通過(guò)體外懸浮培養(yǎng)而建株，并在建株細(xì)胞涂片中用電鏡觀察到皰疹病毒顆粒而命名的。其中，人體Hawley EB病毒株作為轉(zhuǎn)化型病毒，廣泛用于體外轉(zhuǎn)化靜息B淋巴細(xì)胞，在細(xì)胞毒性T細(xì)胞抑制劑的幫助下，通過(guò)CD21（CR2）受體進(jìn)入B細(xì)胞，產(chǎn)生永生化類淋巴母細(xì)胞系（immortalized lymphoblastoid cell line），不斷繁殖，從而提供免疫、分子和功能研究的生物源材料，以及基因組DNA的原始材料，同時(shí)長(zhǎng)期保存各種疾病相關(guān)性細(xì)胞庫(kù)；用于研究EB病毒本身的潛伏性和腫瘤生成機(jī)制；用于制備單克隆抗體和MHC蛋白抗原等。 
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A）   500毫升
HEPENGBIO抑制液（Reagent B）   200微升
HEPENGBIO轉(zhuǎn)化液（Reagent C）   10 X 500微升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A）在4℃冰箱里，HEPENGBIO抑制液（Reagent B）在－20℃冰箱里，HEPENGBIO轉(zhuǎn)化液（Reagent C）在-70℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，注意生物安全；有效保證3月
 
用戶自備
 
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
25和75cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶：用于細(xì)胞培養(yǎng)的容器
二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于細(xì)胞培養(yǎng)
4℃臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
光學(xué)顯微鏡：用于觀察細(xì)胞形態(tài)
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑置于冰槽里凍融，同時(shí)將HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A）置于37℃恒溫水槽預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作。
 
1． 準(zhǔn)備好新鮮分離（2小時(shí)內(nèi)）的5毫升淋巴細(xì)胞懸液（2 X 10⁶細(xì)胞/毫升）
2． 轉(zhuǎn)移到15毫升錐形離心管
3． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為600g
4． 小心抽去上清液
5． 加入5毫升預(yù)熱的HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
6． 轉(zhuǎn)移到25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶里
7． 加入20微升HEPENGBIO抑制液（Reagent B），充分混勻
8． 豎立放進(jìn)37℃二氧化碳培養(yǎng)箱里孵育60分鐘
9． 置于37℃恒溫水槽快速凍融1管HEPENGBIO轉(zhuǎn)化液（Reagent C）
10． 加入500微升HEPENGBIO轉(zhuǎn)化液（Reagent C）到細(xì)胞培養(yǎng)瓶里，充分混勻
11． 豎立放進(jìn)37℃二氧化碳培養(yǎng)箱里孵育1至2周（注意：可見(jiàn)培養(yǎng)液變成桔黃色，細(xì)胞成小團(tuán)聚集；務(wù)必不要等到溶液顏色為純黃色）
12． 加入5毫升新鮮的HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A），混勻
13． 豎立放進(jìn)37℃二氧化碳培養(yǎng)箱里孵育3天
14． 小心移去5毫升陳舊培養(yǎng)液
15． 加入5毫升新鮮的HEPENGBIO培養(yǎng)液（Reagent A），混勻
16． 豎立放進(jìn)37℃二氧化碳培養(yǎng)箱里孵育3天（注意：溶液顏色為桔紅色，換液為佳，務(wù)必不要等到溶液顏色為純黃色）
17． 每隔3天重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟14至16一次，持續(xù)3周（注意：可見(jiàn)細(xì)胞成較大團(tuán)聚集，且細(xì)胞總量達(dá)5 X 10⁶）
18． 轉(zhuǎn)移到50毫升75cm²培養(yǎng)瓶里繼續(xù)培養(yǎng)或分裝成1 X 10⁶ 細(xì)胞/毫升/管凍存
19． （選擇步驟）傳代培養(yǎng)：1 X 10⁵/毫升
20． 光學(xué)顯微鏡觀察：5周后成團(tuán)細(xì)胞形態(tài)（10 X）