突觸體（synaptosome），又稱為純化的神經(jīng)末端（nerve terminals），源自于神經(jīng)軸突（axons）和突觸后連接（postsynaptic connections），內(nèi)含有細(xì)胞漿、突觸囊泡（synaptic vesicle；SV）、突觸后致密區(qū)（postsynaptic density；PSD）、線粒體和細(xì)胞骨架等結(jié)構(gòu)，其具有生產(chǎn)ATP，具備功能性離子通道、載體和受體，維持膜電位和離子內(nèi)平衡、攝取和釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)（neurotransmitters），胞飲（endosytosis）等功能。突觸體成為腦組織中突觸功能分子機(jī)制研究的模型系統(tǒng)，以提供足夠的蛋白生化材料，識(shí)別主要的神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)及其代謝活性、攝取和釋放機(jī)制，發(fā)現(xiàn)突觸傳導(dǎo)調(diào)節(jié)信號(hào)通路，包括學(xué)習(xí)、記憶、感覺(jué)整合、運(yùn)動(dòng)調(diào)度和情緒反應(yīng)等，研究突觸功能異常與衰老和神經(jīng)性疾病的相關(guān)性。突觸體細(xì)胞器的分離是現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究的最常用的手段之一。從腦組織或神經(jīng)細(xì)胞分離突觸體的方法基本上采用：第一，通過(guò)機(jī)械方法破裂組織細(xì)胞；第二，通過(guò)低速差速離心去除殘?jiān)樾?、巨大?xì)胞器（細(xì)胞核），剝離神經(jīng)末端部分，且重新封口，形成膜性液囊（sac）；第三，通過(guò)高速差速離心獲得突觸體、質(zhì)膜、髓磷脂（myelin）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、突觸體外線粒體；甚至第四，可以通過(guò)等密度離心獲得純度更高的突觸體，去除髓磷脂（myelin）和突觸體外線粒體等。 
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）    毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B）    毫升
HEPENGBIO保存液（Reagent C）    毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)    1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO裂解液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
 
用戶自備
 
HANK平衡鹽緩沖溶液（HEPENGBIO12028）或PBS緩沖溶液（HEPENGBIO12033）：用于清理細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于細(xì)胞脫離
完全細(xì)胞培養(yǎng)液（HEPENGBIO12052）：用于細(xì)胞處理所需的培養(yǎng)基
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
4℃臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
4℃超速離心機(jī)：用于樣品操作
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細(xì)胞
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
一、 組織突觸體分離
 
1． 手術(shù)取出動(dòng)物腦組織，并秤重以確定1克組織重量 
2． （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎組織
5． 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
6． 加入xx毫升預(yù)冷的HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
7． 渦旋震蕩5秒，充分混勻
8． 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
9． 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下）（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng)8）
10． 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
11． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
12． 小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細(xì)胞核和未溶解的細(xì)胞
13． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心30分鐘，速度為15000g
14． 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得突觸體沉淀物
15． （選擇步驟）加入xx毫升預(yù)冷的HEPENGBIO保存液（Reagent C）
16． （選擇步驟）放進(jìn)4℃超速離心機(jī)再次離心15分鐘，速度為15000g
17． （選擇步驟）小心抽去上清液
18． 加入xx毫升HEPENGBIO保存液（Reagent C），充分混勻
19． 即刻移入1.5毫升離心管，放進(jìn)－70℃冰箱里
 
二、細(xì)胞突觸體分離
 
1． 準(zhǔn)備5至10瓶75cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶的細(xì)胞（5 X 10⁷），直至細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿整個(gè)培養(yǎng)表面
2． 分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面，然后抽去
3． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2一次
4． 加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)表面
5． 置入37℃培養(yǎng)箱3分種
6． 輕輕手擊震動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落，
7． 分別加入10毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液
8． 移入一個(gè)50毫升錐形離心管
9． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為200g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升預(yù)冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞
12． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入xx毫升預(yù)冷的HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
15． 渦旋震蕩5秒，充分混勻細(xì)胞顆粒群
16． 即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
17． 在冰槽里用勻漿棒勻化細(xì)胞（約20至40下）（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng)8）
18． 將所有細(xì)胞勻漿物移入15毫升錐形離心管
19． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
20． 小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細(xì)胞核和未溶解的細(xì)胞
21． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心30分鐘，速度為15000g
22． 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得突觸體沉淀物
23． （選擇步驟）加入xx毫升預(yù)冷的HEPENGBIO保存液（Reagent C）
24． （選擇步驟）放進(jìn)4℃超速離心機(jī)再次離心15分鐘，速度為15000g
25． （選擇步驟）小心抽去上清液
26． 加入xx毫升HEPENGBIO保存液（Reagent C），充分混勻
27． 即刻移入1.5毫升離心管，放進(jìn)－70℃冰箱里