膜性囊泡（membrane vesicle）分成正常外向膜性囊泡（Right-side out；RSOV）和內側外翻膜性囊泡（In-side out；IOV）。正常外向膜性囊泡是通過去除細胞漿內容物，使之失去細內在的代謝系統(tǒng)，同時保持質膜的原始位相，有利于提供適合的底物，不會受到降解和代謝，建立動力機制，進行轉運或攝入研究，例如微粒體組分用于V型ATP酶研究、線粒體組分用于F型ATP酶研究。而內側外翻膜性囊泡是通過裂解細胞和細胞器后，質膜重新閉合形成內側面外翻的囊泡狀結構， 用于原發(fā)性轉運系統(tǒng)的研究。

 

產(chǎn)品內容

 
HEPENGBIO 清理液（Reagent A） 100 毫升
HEPENGBIO 平衡液（Reagent B） 60 毫升
HEPENGBIO 保存液（Reagent C） 20 毫升
產(chǎn)品說明書 1 份
 

保存方式

 
保存 HEPENGBIO 保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；有效保證 6 月
 

用戶自備

 
50 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5 毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器4℃超速離心機：用于分離膜性囊泡DOUNCE 勻漿器：用于裂解細胞
 

實驗步驟

 

一、正常外向膜性囊泡分離（線粒體和微粒體）

 
1. 準備好 50 毫升新鮮真菌/酵母樣品
2. 在分光光度儀上測 OD₆₀₀＝1.0（1 OD＝1 X 107 細胞/毫升；總量為 5 X 10⁸ 細胞）
3. 轉移到預冷的 50 毫升錐形離心管
4. 放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 3000g
5. 小心抽去上清液
6. 加入適量的 5 毫升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
7. 放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 3000g
8. 小心抽去上清液
9. 即刻放入液氮罐過夜
10. 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎細胞成粉末（注意：切莫使細胞凍融）
11. 放進一個 15 毫升錐形離心管
12. 加入 3 毫升預冷的 HEPENGBIO 平衡液（Reagent B）
13. 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻
14. 即刻放入預冷的 DOUNCE 勻漿器
15. 在冰槽里用研磨棒勻化細胞（約 80 下）
16. 將所有細胞勻漿物移入 15 毫升錐形離心管
17. 放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1000g
18. 小心移出上清液到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管
19. 放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 10000g
20. 小心移出上清液到 2 個新的 1.5 毫升離心管，同時保留沉淀顆粒
21. 加入 500 微升 HEPENGBIO 保存液（Reagent C）到沉淀顆粒管――此為線粒體 RSOV 組分（注意： 可用于 F 型 ATP 酶研究）
22. 將含有上清液的 2 個 1.5 毫升離心管放進 4℃超速離心機離心 60 分鐘，速度為 100000g
23. 小心抽去上清液
24. 分別加入 500 微升 HEPENGBIO 保存液（Reagent C）――此為微粒體 RSOV 組分（注意：可用于 V

型 ATP 酶研究）

25. 移取 10 微升進行蛋白質定量測定（注意：建議使用 HEPENGBIO Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒－
HEPENGBIO30030.1）
26. 即刻放進－70℃冰箱里保存
 

二、內側外翻膜性囊泡分離（質膜分離）

 
 
1. 準備好 50 毫升新鮮真菌/酵母樣品
2. 在分光光度儀上測 OD₆₀₀＝1.0（1 OD＝1 X 107 細胞/毫升；總量為 5 X 10⁸ 細胞）
3. 轉移到預冷的 50 毫升錐形離心管
4. 放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 3000g
5. 小心抽去上清液
6. 加入適量的 5 毫升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
7. 放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 3000g
8. 小心抽去上清液
9. 即刻放入液氮罐過夜
10. 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎細胞成粉末（注意：切莫使細胞凍融）
11. 放進一個 15 毫升錐形離心管