細(xì)胞培養(yǎng)中的主要微生物污染包括支原體（mycoplasma）、細(xì)菌、真菌、酵母和病毒等。在含有抗生素的培養(yǎng)液中，低水平的細(xì)菌污染則難以觀察和發(fā)現(xiàn)。SYTO-9染料為一種自由穿透質(zhì)膜，并特異性結(jié)合核酸的熒光染料，一旦結(jié)合，呈現(xiàn)強(qiáng)力的綠色熒光。細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)菌污染定性熒光染色，通過SYTO-9對(duì)細(xì)菌核酸的染色，替代細(xì)菌培養(yǎng)，具有快速檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)中細(xì)菌的存在，在熒光顯微鏡下（激發(fā)波長(zhǎng)485nm，散發(fā)波長(zhǎng)500nm）下觀察到綠色點(diǎn)狀（dots）或桿狀（rods）。
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）     毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B）   微升
HEPENGBIO稀釋液（Reagent C）   毫升
產(chǎn)品說明書   1份
 
保存方式
 
保存在-20℃冰箱里，避免光照；有效保證6月
 
用戶自備
 
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
載玻片和蓋玻片：用于樣品染色的載體
臺(tái)式離心機(jī)：用于懸浮細(xì)胞操作
細(xì)胞培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿：用于培養(yǎng)細(xì)胞的容器
熒光顯微鏡：用于觀察熒光染色情況
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開始前，將-20的試劑置于室溫下凍融。然后移取xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent B）到1.5毫升離心管，加入xx微升HEPENGBIO稀釋液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為HEPENGBIO染色工作液，放進(jìn)暗室里備用。
 
一、 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)
 
1． 準(zhǔn)備好待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)至50％鋪滿率 
2． 小心移取5毫升細(xì)胞培養(yǎng)容器里的培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管
3． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為1000g
4． 小心抽掉上清液
5． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
6． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為1000g
7． 小心抽掉上清液
8． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻
9． 移取20微升混勻液到潔凈的載玻片上
10． 放進(jìn)37培養(yǎng)箱孵育10分鐘，使其晾干
11． 快速在酒精燈火上加熱固定（注意：切忌過熱處理）
12． 加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
13． 室溫下孵育5分鐘
14． 小心抽去清理液
15． 加上xx微升HEPENGBIO染色工作液在載玻片上，蓋上蓋玻片
16． 在室溫下，暗室里孵育5分鐘 
17． （選擇步驟）移去蓋玻片，小心抽去染色液
18． （選擇步驟）小心加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
19． （選擇步驟）小心抽去清理液
20． 封片處理
21． 置于熒光顯微鏡下觀察染色情況（400至1000倍放大倍數(shù)）：激發(fā)波長(zhǎng)485nm，散發(fā)波長(zhǎng)500nm
胞漿內(nèi)或細(xì)胞外呈現(xiàn)點(diǎn)狀、桿狀、散粒、纖絲狀等綠色熒光 
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)
1． 將待測(cè)懸浮細(xì)胞（1 X 10⁵總量）移入到15毫升錐形離心管
2． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為1000g 
3． 小心抽去上清液
4． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
5． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽去上清液
7． 加入xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
8． 移取20微升混勻液到潔凈的載玻片上
9． 放進(jìn)37培養(yǎng)箱孵育10分鐘，使其晾干
10． 快速在酒精燈火上加熱固定（注意：切忌過熱處理）
11． 加上50微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
12． 室溫下孵育5分鐘
13． 小心抽去清理液
14． 加上xx微升HEPENGBIO染色工作液在載玻片上，蓋上蓋玻片
15． 在室溫下，暗室里孵育5分鐘 
16． （選擇步驟）移去蓋玻片，小心抽去染色液
17． （選擇步驟）小心加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
18． （選擇步驟）小心抽去清理液
19． 封片處理
20． 置于熒光顯微鏡下觀察染色情況（400至1000倍放大倍數(shù)）：激發(fā)波長(zhǎng)485nm，散發(fā)波長(zhǎng)500nm
胞漿內(nèi)或細(xì)胞外呈現(xiàn)點(diǎn)狀、桿狀、散粒、纖絲狀等綠色熒光