小鼠單抗Ig類/亞類/亞型鑒定用ELISA試劑盒使用說明書
 ==========================================================================================
一、試劑原理：本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克隆抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類以及輕鏈亞型（IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA\Kappa\Lambda均可以清晰區(qū)分）。本試劑盒采用小鼠抗體共有位點的二抗包被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標記的抗小鼠各類、亞類、亞型的抗體來分別反應，最后用TMB底物系統(tǒng)顯色并通過酶標儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類以及亞型。本試劑盒具有極高的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類以及亞型的可靠工具。
二、組成成分：

酶標板     含自封袋2個	2ⅹ96孔	標本稀釋液	15ml
通    通用陽性對照	1.8ml	顯色劑A	15ml
通用陰性對照	1.8ml	顯色劑B	15ml
酶標二抗         8種	8×3.2ml	反應終止液	15ml
20×清洗液	50mL	加樣圖	2份
封板膜	4張	說明書	1份

三、使用范圍：用于雜交瘤細胞培養(yǎng)上清中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類、亞型的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。
四、使用方法：
1、首先將試劑盒恢復室溫（大約30分），然后用純水把清洗液配成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。
2、取出酶標板。每個標本需要8孔，陽性對照8孔，陰性對照8孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。
3、將標本檢測孔每孔先加入標本稀釋液各50μl。然后將50μl細胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標微孔板，每個標本加8孔；陽性對照和陰性對照孔不加標本稀釋液也是各加8孔每孔100μl。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
4、棄去板內(nèi)液體，手工洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干（或機洗5遍）。再在每個標本的8孔中分別加入8種酶標二抗各100μl，通用陰陽性對照的各8孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
5、吸棄板內(nèi)液體，手工洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干（或機洗5遍）。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。
6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍的那個孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。更可將反應終止液（每孔50μl）終止反應后用酶標儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結(jié)果，參看高值孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類(陽性對照OD一般不小于0.8，陰性對照一般不高于0.12，陽性判定標準：樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15，陰性O(shè)D低于0.05按0.05算)。
 
五、保存條件：不開啟2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過于頻繁開啟使用有可能因此使效期縮短。
六、注意事項：
1、雖然本試劑盒過期后很久還有使用價值但還是請您在有效期內(nèi)使用。
2、在檢測腹水類單抗時要稀釋到1/5萬，雖然可以分辨但并不建議您這樣做。此類樣品成分十分復雜，有干擾結(jié)果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的抗體鑒定試劑。它會給您帶來滿意的結(jié)果。
           您也可以將酶標板更換成您自己的抗原包被板那樣也是可以用來測試腹水、以至于幾乎任意一種形式的單抗樣本的檢測，結(jié)果同樣跟上清一樣滿意！
3、手洗板子時一定要把孔加滿，停留10秒然后棄盡，最后要拍干凈。特別是在酶標二抗溫育后洗板時一定要把酶吸出而不是甩出，要吸凈。這個在手工洗板時對結(jié)果很重要。
4、一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。
5、拿放板子時不要劇烈抖動，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯誤結(jié)果。
6、本試劑一般不會出現(xiàn)兩個陽性，但出現(xiàn)兩個陽性的現(xiàn)象有時候是真實存在的，一般會一個OD很高,另一個很低但卻還能判為陽性，實驗分析表明這種情況下以O(shè)D高值孔為準，出現(xiàn)這種情況有多重原因：1、培養(yǎng)的細胞中有“飼養(yǎng)細胞”殘留，2、抗體本身存在變異，3、融合的淋巴細胞取自不純的BALB/C，4、樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，5、上清出現(xiàn)少量污染，6、實驗操作粗放，7、加錯試劑。