脂滴（lipid droplet）是細(xì)胞中由中性脂質(zhì)（甘油三酯、膽固醇酯）和少量蛋白為核心，外包一層磷脂和膽固醇構(gòu)成的帶有蛋白的膜?？梢?jiàn)于大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞中。在脂肪細(xì)胞中，脂滴存儲(chǔ)大量甘油三酯，作為能量之源，而在其它細(xì)胞中，用于膽固醇內(nèi)平衡的維持。脂滴具有幫助膜合成和修復(fù)，固醇類激素合成，以及提供脂類代謝酶的底物等功能。通過(guò)差速和等密度離心處理，獲得脂滴細(xì)胞器，用于后續(xù)脂質(zhì)定量和蛋白分離等。  
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）   毫升
HEPENGBIO低滲液（Reagent B）      毫升
HEPENGBIO分離液A（Reagent C）   毫升
HEPENGBIO分離液B（Reagent D）   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)   1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO低滲液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
 
用戶自備
 
HANK平衡鹽緩沖溶液（HEPENGBIO12028）或PBS緩沖溶液（HEPENGBIO12033）：用于清理細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于細(xì)胞脫離
完全細(xì)胞培養(yǎng)液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的細(xì)胞培養(yǎng)基
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
超速離心機(jī)：用于樣品操作
DOUNCE勻漿器：用于裂解細(xì)胞
渦旋震蕩儀：用于混勻
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進(jìn)行下列操作。
 
1． 準(zhǔn)備5至10瓶75cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶的細(xì)胞（5 X 10⁷），直至細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿整個(gè)培養(yǎng)表面
2． 分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面，然后抽去
3． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2一次
4． 加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個(gè)培養(yǎng)平面
5． 置入37℃培養(yǎng)箱3分種
6． 輕輕手擊震動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落
7． 分別加入10毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液
8． 移入一個(gè)50毫升錐形離心管
9． 放入臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升預(yù)冷的HEPENGBIO清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞
12． 放入臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
13． 小心抽去上清液
14． 加入預(yù)冷的xx毫升HEPENGBIO低滲液（Reagent B）
15． 渦旋震蕩5秒，充分混勻
16． 冰上孵育10分鐘
17． 即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
18． 置于冰槽里用勻漿棒勻化細(xì)胞（約40下）
19． 將所有細(xì)胞勻漿物移入15毫升錐形離心管 
20． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
21． 小心移出1毫升白色懸浮脂質(zhì)層到新的15毫升錐形離心管
22． 放進(jìn)－70℃冰箱里備用或放進(jìn)冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
23． 加入預(yù)冷的xx微升HEPENGBIO分離液A（Reagent C），混勻（注意：將脂質(zhì)團(tuán)均勻混勻）
24． 轉(zhuǎn)移到13毫升超速離心管
25． 小心沿著管壁，在樣品上面，一滴一滴加入xx毫升HEPENGBIO分離液B（Reagent D）（注意：避免晃動(dòng)）
26． 小心沿著管壁，一滴一滴加入xx毫升HEPENGBIO低滲液（Reagent B）在HEPENGBIO分離液B（Reagent D）上面，直至加滿離心管（注意：避免晃動(dòng)）
27． 小心放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心30分鐘，速度為28000g 
28． 小心取出離心管 
29． 小心抽取懸浮不透明的白色脂質(zhì)層到新的15毫升離心管 
30． 加入適量預(yù)冷的HEPENGBIO低滲液（Reagent B），混勻
31． 放進(jìn)－70℃冰箱里保存或置于冰槽里準(zhǔn)備后續(xù)操作（脂質(zhì)定量、脂滴蛋白萃取等）