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細(xì)菌處于容易吸收外源DNA的狀態(tài)叫感受態(tài)。轉(zhuǎn)化是指質(zhì)粒DNA或以它為載體構(gòu)建的重組子導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程。其原理是細(xì)菌處于 0℃，在脈沖電場(chǎng)作用下，感應(yīng)電荷的細(xì)胞膜暫時(shí)出現(xiàn)微孔，其結(jié)果是細(xì)胞內(nèi)外分子交換顯著增加，促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物，以及各種藥物、蛋白質(zhì)和其它大分子等。電場(chǎng)取消后微孔關(guān)閉而不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成任何影響。產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO 培養(yǎng)液（Reagent A） 毫升HEPENGBIO 宿主液（Reagent B） 微升
HEPENGBIO 調(diào)理液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1 份
保存方式
保存 HEPENGBIO 宿主液（Reagent B）在－70℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，有效保證 6 月
用戶自備
250 毫升玻璃燒瓶：用于操作的容器
4℃臺(tái)式離心機(jī)：用于沉淀細(xì)菌
50 毫升錐形離心管：用于操作的容器
1.5 毫升離心管：用于保存感受態(tài)細(xì)胞恒溫?fù)u床：用于培養(yǎng)細(xì)菌
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 準(zhǔn)備 1 個(gè) 50 毫升錐形離心管
2. 加入xx 毫升 HEPENGBIO 培養(yǎng)液（Reagent A）
3. 加入xx 微升 HEPENGBIO 宿主液（Reagent B）
4. 放進(jìn) 37℃恒溫?fù)u床孵育過(guò)夜，速度為 200RPM
5. 準(zhǔn)備 2 個(gè) 250 毫升無(wú)菌燒瓶，分別加入xx 毫升 37℃預(yù)熱的 HEPENGBIO 培養(yǎng)液（Reagent A）
6. 分別移出xx 微升上述菌液到含有 HEPENGBIO 培養(yǎng)液（Reagent A）的 250 毫升無(wú)菌燒瓶
7. 放進(jìn) 37℃恒溫?fù)u床孵育 5 小時(shí)，速度為 200RPM，直至 OD550＝0.8
8. 分別移出 45 毫升新鮮菌液到 4 個(gè)新的 50 毫升錐形離心管
9. 放進(jìn)冰槽里孵育 60 分鐘
10. 放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 2600g
1. 小心抽去上清液
12. 分別加入xx 毫升預(yù)冷的 HEPENGBIO 調(diào)理液（Reagent C），充分混勻
13. 放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 30 分鐘，速度為 2600g
14. 小心抽掉上清液
15. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 12 至 13 一次
16. 小心抽去 40 毫升上清液，保留 5 毫升上清液
17. 合并到 1 個(gè) 50 毫升錐形離心管
18. 放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 2600g
19. 小心抽去 19 毫升上清液，保留 1 毫升上清液
20. 混勻細(xì)胞顆粒群
21. 即刻分別移入 20 微升上述菌液分裝到預(yù)冷的 1.5 毫升離心管（50 管）
2. 即刻放進(jìn)－70℃冰箱保存?zhèn)溆?/div>
檢測(cè)報(bào)告（COA）
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