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抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate resistant acid phosphatase；TRAP）是一種在哺乳動物內(nèi)表達(dá)的糖化單體金屬蛋白酶，970多堿基，320多氨基酸，分子量為35kD。作為破骨細(xì)胞的標(biāo)志，抗酒石酸酸性磷酸酶與破骨細(xì)胞調(diào)節(jié)的骨再吸收（resorption）活性和骨生成代謝有關(guān)。抗酒石酸酸性磷酸酶是以酶原形式合成，通過蛋白酶裂解和還原后活化。在酸性環(huán)境下，催化磷酸酯鍵的水解，產(chǎn)生醇和釋放磷酸。其特征性為酒石酸抗性而與其它酸性磷酸酶區(qū)別?？咕剖崴嵝粤姿崦冈谄乒羌?xì)胞（osteoclast）、活化的巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞以及懷孕期的豬內(nèi)皮層子宮內(nèi)膜（endometrium）高度表達(dá)。在網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖（leukaemic reticuloendotheliosis）或毛細(xì)胞性白血?。╤airy cell leukaemia）、戈謝?。℅aucher’s disease）、愛茲性腦病（HIV-induced encephalopathy）、骨巨細(xì)胞瘤（osteoclastoma）、骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis）和代謝性骨病等病人體內(nèi)抗酒石酸酸性磷酸酶顯著增高。 通過抗酒石酸酸性磷酸酶多克隆抗體以及辣根過氧化物酶綴合物二抗（Peroxidase conjugated antibody）反應(yīng)，進(jìn)而使用染料二氨基聯(lián)苯胺染色顯示抗酒石酸酸性磷酸酶表達(dá)陽性破骨細(xì)胞為棕褐色。
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO脫蠟液（Reagent A） 300毫升（自備）
HEPENGBIO補水液A（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO補水液B（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO補水液C（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO補水液D（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent F） 毫升
HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent G） 毫升
HEPENGBIO封阻液（Reagent H） 毫升
HEPENGBIO一抗液（Reagent I） 毫升
HEPENGBIO二抗液（Reagent J） 毫升
HEPENGBIO顯色液A（Reagent K） 微升
HEPENGBIO顯色液B（Reagent L） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent G）、HEPENGBIO一抗液（Reagent I）、HEPENGBIO二抗液（Reagent J）和HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免反復(fù)凍融，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO二抗液（Reagent J）和HEPENGBIO顯色液A（Reagent K），避免光照；有效保證3月
用戶自備
小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟和染色操作
蓋玻片：用于抗體孵育操作
光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析
特別注意
1． HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）和HEPENGBIO顯色液B（Reagent L）必須在實驗操作前即刻混勻；混勻后切忌久放不用或儲存后備用；用完扔掉
2． HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）如果出現(xiàn)沉淀，須過濾后再用
實驗步驟
一、 脫蠟處理
1． 取出10片4至10微米厚的待測石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，此步很重要）
2． （選擇步驟）放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
3． （選擇步驟）室溫下靜置15分鐘
4． 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO補水液D（Reagent E）
6． 小心加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
7． 室溫下孵育5分鐘
小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
二、樣本修復(fù)處理
1． 小心加上xx微升HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
2． 室溫下孵育5分鐘
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent G）
4． 室溫下，將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
6． 小心加上xx微升HEPENGBIO封阻液（Reagent H），鋪滿整個切片樣品表面
7． 室溫下孵育30分鐘
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO封阻液（Reagent H）
9． 室溫下，將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
10． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
三、 免疫標(biāo)記處理
1． 小心加上xx微升含有HEPENGBIO一抗液（Reagent I），鋪滿整個切片樣品表面
2． 室溫下，孵育1小時，保持濕潤，避免干燥（注意：可以使用蓋玻片蓋上孵育）
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO一抗液（Reagent I）
4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
四、樣本染色處理
在染色前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取xx微升HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）和1.8毫升HEPENGBIO顯色液B（Reagent L）到2毫升離心管，充分混勻，標(biāo)記為HEPENGBIO顯色工作液，置于暗室。然后進(jìn)行下列操作：
1． 小心加上xx微升HEPENGBIO二抗液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：可以使用蓋玻片蓋上孵育）
2． 室溫下孵育30分鐘，避免光照
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO二抗液（Reagent J）
4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
6． 小心加上xx微升含有HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）和HEPENGBIO顯色液B（Reagent L）的HEPENGBIO顯色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
7． 室溫下孵育5至60分鐘，或直至樣本出現(xiàn)棕褐色
8． 小心移去切片上含有HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）和HEPENGBIO顯色液B（Reagent L）的HEPENGBIO顯色工作液
9． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中浸泡5秒
10． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
11． （選擇步驟）進(jìn)行甲基綠或蘇木素復(fù)染（注意：建議使用HEPENGBIO甲基綠復(fù)染試劑盒－ ）
12． 放上蓋玻片或封片
13． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽性細(xì)胞呈現(xiàn)棕褐色
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO脫蠟液（Reagent A） 300毫升（自備）
HEPENGBIO補水液A（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO補水液B（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO補水液C（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO補水液D（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent F） 毫升
HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent G） 毫升
HEPENGBIO封阻液（Reagent H） 毫升
HEPENGBIO一抗液（Reagent I） 毫升
HEPENGBIO二抗液（Reagent J） 毫升
HEPENGBIO顯色液A（Reagent K） 微升
HEPENGBIO顯色液B（Reagent L） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent G）、HEPENGBIO一抗液（Reagent I）、HEPENGBIO二抗液（Reagent J）和HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免反復(fù)凍融，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO二抗液（Reagent J）和HEPENGBIO顯色液A（Reagent K），避免光照；有效保證3月
用戶自備
小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟和染色操作
蓋玻片：用于抗體孵育操作
光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析
特別注意
1． HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）和HEPENGBIO顯色液B（Reagent L）必須在實驗操作前即刻混勻；混勻后切忌久放不用或儲存后備用；用完扔掉
2． HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）如果出現(xiàn)沉淀，須過濾后再用
實驗步驟
一、 脫蠟處理
1． 取出10片4至10微米厚的待測石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，此步很重要）
2． （選擇步驟）放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
3． （選擇步驟）室溫下靜置15分鐘
4． 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育
| 染色缸 | 孵育時間 |
| xx毫升HEPENGBIO脫蠟液（Reagent A） | 15分鐘 |
| xx毫升HEPENGBIO脫蠟液（Reagent A） | 15分鐘 |
| xx毫升HEPENGBIO脫蠟液（Reagent A） | 15分鐘 |
| xx毫升HEPENGBIO補水液A（Reagent B） | 3分鐘 |
| xx毫升HEPENGBIO補水液B（Reagent C） | 3分鐘 |
| xx毫升HEPENGBIO補水液C（Reagent D） | 3分鐘 |
| xx毫升HEPENGBIO補水液D（Reagent E） | 3分鐘 |
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO補水液D（Reagent E）
6． 小心加上xx微升HEPENGBIO清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
7． 室溫下孵育5分鐘
小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
二、樣本修復(fù)處理
1． 小心加上xx微升HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
2． 室溫下孵育5分鐘
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent G）
4． 室溫下，將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
6． 小心加上xx微升HEPENGBIO封阻液（Reagent H），鋪滿整個切片樣品表面
7． 室溫下孵育30分鐘
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO封阻液（Reagent H）
9． 室溫下，將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
10． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
三、 免疫標(biāo)記處理
1． 小心加上xx微升含有HEPENGBIO一抗液（Reagent I），鋪滿整個切片樣品表面
2． 室溫下，孵育1小時，保持濕潤，避免干燥（注意：可以使用蓋玻片蓋上孵育）
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO一抗液（Reagent I）
4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
四、樣本染色處理
在染色前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取xx微升HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）和1.8毫升HEPENGBIO顯色液B（Reagent L）到2毫升離心管，充分混勻，標(biāo)記為HEPENGBIO顯色工作液，置于暗室。然后進(jìn)行下列操作：
1． 小心加上xx微升HEPENGBIO二抗液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：可以使用蓋玻片蓋上孵育）
2． 室溫下孵育30分鐘，避免光照
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO二抗液（Reagent J）
4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
6． 小心加上xx微升含有HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）和HEPENGBIO顯色液B（Reagent L）的HEPENGBIO顯色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
7． 室溫下孵育5至60分鐘，或直至樣本出現(xiàn)棕褐色
8． 小心移去切片上含有HEPENGBIO顯色液A（Reagent K）和HEPENGBIO顯色液B（Reagent L）的HEPENGBIO顯色工作液
9． 室溫下，小心將切片置入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent F）中浸泡5秒
10． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent F）
11． （選擇步驟）進(jìn)行甲基綠或蘇木素復(fù)染（注意：建議使用HEPENGBIO甲基綠復(fù)染試劑盒－ ）
12． 放上蓋玻片或封片
13． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽性細(xì)胞呈現(xiàn)棕褐色
