線粒體提取試劑盒說明書貨號：HP0020
規(guī)格：50T/100T
保存：四周內(nèi)使用可 4℃儲存，長期保存請置于-20℃。產(chǎn)品內(nèi)容：

組份 SM0020 -50T SM0020-100T

Lysis Buffer 50 mL 100 mL
Mito-Wash Buffer 25 mL 50 mL
Store Buffer 5 mL 10 mL 產(chǎn)品簡介：
線粒體提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織（肝 或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細胞凋 亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

操作步驟：

1. 樣本處理
a. 組織勻漿：稱取 100~200 mg 新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS 或生理鹽水沖洗，洗凈血 水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入 1.0 mL 冰預(yù)冷的 Lysis Buffer，0℃ 冰浴上下研磨組織 20 次；
b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS 洗滌，800g 離心 5~10 min 收集細胞， 計數(shù)。每次提取需要 5×10 7 個細胞，加入 1.0 mL 冰預(yù)冷的 Lysis Buffer 重懸細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)， 0℃冰浴研磨 30~40 次。
2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000g 離心 5 min。
3. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃，1000g 再次離心 5 min。
4. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心 10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中 提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底。
5. 往線粒體沉淀中加入 0.5 mL Wash Buffer 重懸線粒體沉淀，4℃，1000 g 離心 5 min。
6. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心 10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管 底。
7. 用 50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項：

1. 為保證獲得完整的線粒體，務(wù)必做到：第一，全程低溫操作；第二，快速； 第三，在不破壞亞細 胞器的情況下破碎細胞，這是制備線粒體的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng) 細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁， 因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。
2. 以離心力 g 計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此精確計算離心速度。
3. 進行 Western Blot 和 2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。 轉(zhuǎn)速與離心力換算： G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２ G 為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示； [rpm]２即：轉(zhuǎn)速的平方； R 為半徑，單位為厘米。