微藻中含有許多高濃度多糖(polysaccharide)和多酚(polyphenol)等成分,降解DNA和抑制PCR反應(yīng)。通過冷凍處理、化學(xué)緩沖、孵育溫度、大劑量特級酶、十六烷基三甲基溴化銨CTAB(cetyltrimethyl-ammonium bromide;CTAB)純化、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpolypyrrolidone;PVPP)處理、特別萃取等方法有效地去除各種干擾因子。
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO緩沖液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO裂解液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO分離液(Reagent C) 毫升
HEPENGBIO酶解液(Reagent D) 毫升
HEPENGBIO萃取液(Reagent E) 毫升
HEPENGBIO濃縮液(Reagent F) 毫升
HEPENGBIO沉淀液(Reagent G) 毫升
HEPENGBIO清理液(Reagent H) 毫升
HEPENGBIO保存液(Reagent I) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO裂解液(Reagent B)、HEPENGBIO酶解液(Reagent D)和HEPENGBIO萃取液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月
用戶自備
2毫升離心管:用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器
微型臺式離心機(例如EPPENDORF5415):用于樣品操作
渦旋震蕩儀:用于混勻反應(yīng)物
恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)物
實驗步驟
實驗開始前,將HEPENGBIO裂解液(Reagent B)、HEPENGBIO酶解液(Reagent D)和HEPENGBIO萃取液(Reagent E)從-20℃冰箱里取出,放入冰槽里融化。然后進行下列操作:
1. 移取2毫升微藻菌液到2毫升離心管
2. 放進微型臺式離心機離心3分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
3. 小心抽掉上清液
4. 加入xx毫升HEPENGBIO緩沖液(Reagent A),混勻細(xì)胞顆粒群
5. 放進微型臺式離心機離心3分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
6. 小心抽掉上清液
7. 加入xx微升HEPENGBIO裂解液(Reagent B),混勻細(xì)胞顆粒群
8. 渦旋震蕩15秒
9. 放進37℃恒溫水槽孵育30分鐘
10. 加入xx微升HEPENGBIO分離液(Reagent C)(注意:使用前,先搖勻HEPENGBIO分離液(Reagent C))
11. 加入xx微升HEPENGBIO酶解液(Reagent D)(注意:使用前,先混勻HEPENGBIO酶解液(Reagent D))
12. 渦旋震蕩15秒
13. 放進60℃恒溫水槽孵育30分鐘(注意:可以增加孵育時間至2小時,增加DNA產(chǎn)量)
14. 加入xx微升HEPENGBIO萃取液(Reagent E)(注意:使用前,先搖勻HEPENGBIO萃取液(Reagent E))
15. 渦旋震蕩30秒
16. 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
17. 移出450微升上層液相溶液到新的1.5毫升離心管(注意:不要觸碰相位交界面)
18. 加入xx微升HEPENGBIO濃縮液(Reagent F)
19. 加入xx微升HEPENGBIO沉淀液(Reagent G)
20. 上下翻轉(zhuǎn)10至15次,混勻
21. 放進微型臺式離心機離心15分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
22. 小心抽掉上清液
23. 加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent H)
24. 放進微型臺式離心機離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
25. 小心抽掉上清液
26. 空氣中晾干
27. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent I)
28. 溶解后,移出適量DNA溶液進行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在-20℃冰箱里
注意事項
1. 本產(chǎn)品為20次(2毫升菌液樣品/次)操作
2. 操作時,須戴手套
3. 建議使用新鮮樣品
4. 本產(chǎn)品適合各種微藻菌株
5. 通常1克濕重樣品可以提取10微克左右DNA量;但不同菌株樣品,存在很大差異(5至100微克)
6. HEPENGBIO分離液(Reagent C)易形成晶狀體,使用前可37℃溫育融化
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO緩沖液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO裂解液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO分離液(Reagent C) 毫升
HEPENGBIO酶解液(Reagent D) 毫升
HEPENGBIO萃取液(Reagent E) 毫升
HEPENGBIO濃縮液(Reagent F) 毫升
HEPENGBIO沉淀液(Reagent G) 毫升
HEPENGBIO清理液(Reagent H) 毫升
HEPENGBIO保存液(Reagent I) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO裂解液(Reagent B)、HEPENGBIO酶解液(Reagent D)和HEPENGBIO萃取液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月
用戶自備
2毫升離心管:用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器
微型臺式離心機(例如EPPENDORF5415):用于樣品操作
渦旋震蕩儀:用于混勻反應(yīng)物
恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)物
實驗步驟
實驗開始前,將HEPENGBIO裂解液(Reagent B)、HEPENGBIO酶解液(Reagent D)和HEPENGBIO萃取液(Reagent E)從-20℃冰箱里取出,放入冰槽里融化。然后進行下列操作:
1. 移取2毫升微藻菌液到2毫升離心管
2. 放進微型臺式離心機離心3分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
3. 小心抽掉上清液
4. 加入xx毫升HEPENGBIO緩沖液(Reagent A),混勻細(xì)胞顆粒群
5. 放進微型臺式離心機離心3分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
6. 小心抽掉上清液
7. 加入xx微升HEPENGBIO裂解液(Reagent B),混勻細(xì)胞顆粒群
8. 渦旋震蕩15秒
9. 放進37℃恒溫水槽孵育30分鐘
10. 加入xx微升HEPENGBIO分離液(Reagent C)(注意:使用前,先搖勻HEPENGBIO分離液(Reagent C))
11. 加入xx微升HEPENGBIO酶解液(Reagent D)(注意:使用前,先混勻HEPENGBIO酶解液(Reagent D))
12. 渦旋震蕩15秒
13. 放進60℃恒溫水槽孵育30分鐘(注意:可以增加孵育時間至2小時,增加DNA產(chǎn)量)
14. 加入xx微升HEPENGBIO萃取液(Reagent E)(注意:使用前,先搖勻HEPENGBIO萃取液(Reagent E))
15. 渦旋震蕩30秒
16. 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
17. 移出450微升上層液相溶液到新的1.5毫升離心管(注意:不要觸碰相位交界面)
18. 加入xx微升HEPENGBIO濃縮液(Reagent F)
19. 加入xx微升HEPENGBIO沉淀液(Reagent G)
20. 上下翻轉(zhuǎn)10至15次,混勻
21. 放進微型臺式離心機離心15分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
22. 小心抽掉上清液
23. 加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent H)
24. 放進微型臺式離心機離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
25. 小心抽掉上清液
26. 空氣中晾干
27. 加入xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent I)
28. 溶解后,移出適量DNA溶液進行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在-20℃冰箱里
注意事項
1. 本產(chǎn)品為20次(2毫升菌液樣品/次)操作
2. 操作時,須戴手套
3. 建議使用新鮮樣品
4. 本產(chǎn)品適合各種微藻菌株
5. 通常1克濕重樣品可以提取10微克左右DNA量;但不同菌株樣品,存在很大差異(5至100微克)
6. HEPENGBIO分離液(Reagent C)易形成晶狀體,使用前可37℃溫育融化