細(xì)胞周期是評(píng)價(jià)細(xì)胞代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。通過DNA結(jié)合染料，借助細(xì)胞流式儀，測(cè)定出DNA含量，根據(jù)DNA含量隨著細(xì)胞周期的不同而發(fā)生變化，來確定和區(qū)別細(xì)胞周期的不同階段。流式細(xì)胞術(shù)（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發(fā)展起來的集計(jì)算機(jī)、激光、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)為一體。凋亡細(xì)胞是在正常G0/G1峰細(xì)胞群前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1）細(xì)胞群。
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）     毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B）     毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent C）     微升
HEPENGBIO去干擾劑（Reagent D）     毫升
HEPENGBIO保存液（Reagent E） 毫升
產(chǎn)品說明書  1份
 
保存方法
 
保存HEPENGBIO去干擾劑（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO染色液（Reagent C）避免光照，有效保證6月
 
用戶自備
 
HANKS平衡鹽溶液（HEPENGBIO12022）或PBS緩沖溶液（HEPENGBIO12033）：用于清洗細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HEPENGBIO12024）：用于細(xì)胞脫離
完全細(xì)胞培養(yǎng)液（HEPENGBIO12052）：用于中和胰蛋白酶的處理
15毫升錐形離心管：用于細(xì)胞收集的操作
1.5毫升離心管：用于細(xì)胞染色的容器
臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)胞收集的操作
細(xì)胞流式儀：用于細(xì)胞熒光分析
 
 
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的HEPENGBIO去干擾劑（Reagent D）置入冰槽里融化。移出xx微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent C）和xx微升HEPENGBIO去干擾劑（Reagent D），混勻后標(biāo)記為1號(hào)工作液；再移出xx微升HEPENGBIO保存液（Reagent E）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent C），混勻后標(biāo)記為2號(hào)工作液。工作液置于暗室里，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。
 
1． 準(zhǔn)備1瓶25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶的待測(cè)細(xì)胞，鋪滿率達(dá)70％（約1百萬(wàn)細(xì)胞數(shù)）
2． 小心移出細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管（收集漂浮細(xì)胞）
3． 加入2.5毫升用戶自備的HANKS平衡鹽溶液或PBS緩沖溶液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面
4． 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升錐形離心管
5． 加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鋪滿整個(gè)培養(yǎng)平面
6． 置入37℃培養(yǎng)箱1分種
7． 振動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落，然后加入5毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液
8． 移入到上述15毫升錐形離心管（懸浮細(xì)胞從這一步驟開始）
9． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
12． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
13． 小心抽去上清液
14． 加入500微升1號(hào)工作液，用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻細(xì)胞顆粒群（可以移入到1.5毫升離心管或細(xì)胞流式儀專用測(cè)試管）
15． 在暗室里室溫下孵育60分鐘
16． 加入500微升2號(hào)工作液，用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻
17． 移入到細(xì)胞流式儀專用測(cè)試管（可放進(jìn)4℃冰箱里待測(cè)）
18． 即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析：波長(zhǎng)488nm氬離子激光（或488nm激發(fā)波長(zhǎng)，610nm散發(fā)波長(zhǎng)），觀察50000個(gè)細(xì)胞以上