在蛋白純化和融化過程中，特別是包涵體蛋白，變性劑（denaturant）提供了最有效的手段，其獲得的純化蛋白屬于變性蛋白（denatured protein）。為了使變性蛋白恢復(fù)為天然蛋白（native protein），即具有蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu)和活性，需要進(jìn)行蛋白復(fù)性（renaturation）或重新折疊（refolding）。蛋白復(fù)性是一個復(fù)雜的過程，諸如pH、離子強(qiáng)度、低分子添加劑、氧化還原電位（redox potential）和溫度等物化因子，影響體外蛋白復(fù)性的效率。通常體外復(fù)性的方法包括稀釋法和緩沖交換法。前者通過化學(xué)處理，而后者采用物理方法（例如透析、膜過濾（diafiltration）、凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）等，以達(dá)到蛋白復(fù)性的效果。L-精氨酸（L－arginine）、聚乙二醇（PEG）、硫代甜菜堿（sulfobetaine）、去垢劑、變性劑等將影響化學(xué)稀釋復(fù)性處理的效率。
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO稀釋液（Reagent A）   毫升
HEPENGBIO還原液（Reagent B）      毫升
HEPENGBIO平衡液（Reagent C）      毫升
產(chǎn)品說明書       1份
 
保存方式
 
保存在-20℃冰箱里， 避免光照，有效保證6月
 
用戶自備
 
1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器
恒溫?fù)u床：用于反應(yīng)孵育
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
方法一：還原復(fù)性
 
1． 準(zhǔn)備好可溶性純化變性蛋白樣品
2． 移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管
3． 加入適量的HEPENGBIO稀釋液（Reagent A）調(diào)整蛋白濃度到10毫克/毫升
4． 移取100微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管
5． 加入xx微升HEPENGBIO還原液（Reagent B）
6． 放進(jìn)20℃恒溫?fù)u床孵育4小時，速度為200RPM
7． （選擇步驟）移取10微升進(jìn)行生物檢測，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)等確定復(fù)性蛋白活性值
8． 即刻放進(jìn)－70℃冰箱里保存
 
方法二：平衡復(fù)性
 
1．準(zhǔn)備好可溶性純化變性蛋白樣品
2．移取適量的蛋白樣品到1.5毫升離心管
3． 加入適量的HEPENGBIO稀釋液（Reagent A）調(diào)整蛋白濃度到5毫克/毫升
4． 移取5微升蛋白樣品到新的1.5毫升離心管
5． 加入xx微升HEPENGBIO平衡液（Reagent C）
6． 放進(jìn)28℃恒溫?fù)u床孵育2小時，速度為200RPM
7． （選擇步驟）移取10微升進(jìn)行生物檢測，例如蛋白功能或活性：比色法、HPLC、受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)等確定復(fù)性蛋白活性值
8． 即刻放進(jìn)－70℃冰箱里保存