甘油三酯（Triglyceride；TG）是脂類物質(zhì)（包括脂肪酸及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇類物質(zhì)，例如膽固醇）的一種，由3分子長(zhǎng)鏈脂肪酸和1分子甘油脂化形成的脂肪分子。甘油三酯是人體內(nèi)含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，同時(shí)肝臟、脂肪等組織還可以進(jìn)行甘油三酯的合成，在脂肪組織中貯存。甘油三酯水平的異常，與動(dòng)脈粥樣硬化等疾病有關(guān)。通過(guò)胰酯酶（pancreatic lipase）水解甘油三酯，釋放出脂肪酸，然后運(yùn)用格莫瑞（Gomori）鈣-鉛-硫酸鹽方法，即與鈣離子反應(yīng)后，脂肪酸成為不溶性鈣皂（calcium soap），然后與鉛離子交換，形成鉛皂（lead soap），最終轉(zhuǎn)換成硫酸鉛，特異性進(jìn)行中性甘油三酯，而不是脂蛋白、磷脂、膽固醇等的組織化學(xué)染色，而避免油性紅O（Oil Red O）的非特異性，且全脂質(zhì)染色的缺陷。由于組織切片在包埋前處理和染色前脫蠟的過(guò)程中，有機(jī)溶劑容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此防護(hù)和固定組織中的脂質(zhì)成分是該染色的關(guān)鍵。  
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO清理液（Reagent A）  毫升
HEPENGBIO固著液（Reagent B）  毫升
HEPENGBIO乳化液（Reagent C）  毫升
HEPENGBIO凈化液（Reagent D）  毫升
HEPENGBIO氧化液（Reagent E）  毫升
HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent F）  毫升
HEPENGBIO去石蠟液（Reagent G）       毫升
HEPENGBIO補(bǔ)水液A（Reagent H）  毫升
HEPENGBIO補(bǔ)水液B（Reagent I）  毫升
HEPENGBIO補(bǔ)水液C（Reagent J）  毫升
HEPENGBIO補(bǔ)水液D（Reagent K）  毫升
HEPENGBIO皂化液（Reagent L）  毫升
HEPENGBIO水解液（Reagent M）  毫升
HEPENGBIO置換液（Reagent N）  毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent O）  毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)  1份
 
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO水解液（Reagent M）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
 
用戶自備
 
蘇木素復(fù)染試劑盒（HEPENGBIO80067）：用于常規(guī)染色后復(fù)染
經(jīng)典水相封片液（HEPENGBIO12146）：用于染色后封片處理
無(wú)離子水：用于清洗樣品
無(wú)菌手術(shù)刀和鑷子：用于組織塊處理
恒溫培養(yǎng)箱：用于組織處理孵育
6孔細(xì)胞培養(yǎng)板：用于組織處理的容器
小型玻璃染色缸：用于組織或切片處理的容器
切片機(jī)：用于組織切片
明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片
中性樹(shù)脂：用于切片封片
光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
一、 樣本固著處理
 
1． 用無(wú)菌手術(shù)刀將新鮮組織切成2毫米厚的組織塊
2． 即刻用無(wú)菌鑷子夾起組織塊，小心放進(jìn)xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）中浸泡3秒2次
3． 轉(zhuǎn)移到xx毫升HEPENGBIO固著液（Reagent B）里 
4． 室溫下浸泡孵育24小時(shí)，避免光照
5． 即刻用無(wú)菌鑷子夾起組織塊，小心放進(jìn)上述xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）中浸泡1小時(shí)
6． 小心轉(zhuǎn)移到xx毫升HEPENGBIO乳化液（Reagent C）里（注意：如果組織已經(jīng)使用福爾馬林固定的，則從這一步驟開(kāi)始）
7． 在56℃恒溫培養(yǎng)箱里浸泡孵育48小時(shí)，避免光照
8． 準(zhǔn)備1個(gè)6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，分別加入xx毫升HEPENGBIO凈化液（Reagent D）到3個(gè)孔里
9． 再分別加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到另外3個(gè)孔里
10． 小心轉(zhuǎn)移組織塊到上述6孔板的第一個(gè)孔里
11． 室溫下孵育1小時(shí)
12． 轉(zhuǎn)移組織塊到上述6孔板的第二個(gè)孔里
13． 室溫下孵育1小時(shí)
14． 依次直到第六個(gè)孔
15． 小心轉(zhuǎn)移組織塊到新鮮的xx毫升HEPENGBIO氧化液（Reagent E）里
16． 在4℃冰箱里浸泡孵育24小時(shí)，避免光照
17． 小心轉(zhuǎn)移到20毫升用戶自備的無(wú)離子水里
18． 室溫下孵育24小時(shí)
19． 小心轉(zhuǎn)移到xx毫升HEPENGBIO修復(fù)液（Reagent F）里
20． 室溫下浸泡孵育24小時(shí)，避免光照
21． 小心轉(zhuǎn)移到20毫升用戶自備的無(wú)離子水里
22． 室溫下孵育8小時(shí)（注意：可以孵育24小時(shí)）
23． 用綿紙吸干組織快
24． 即刻進(jìn)行石蠟包埋
25． 取出組織塊，進(jìn)行緩慢石蠟切片，為10微米厚，并鋪片在明膠化切片上
 
二、 去石蠟處理
 
1． 取出10片待測(cè)的10微米厚的石蠟包埋的組織切片
2． 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
3． 室溫下靜置15分鐘
4． 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育
 

染色缸	孵育時(shí)間
xx毫升HEPENGBIO去石蠟液（Reagent G）	15分鐘
xx毫升HEPENGBIO去石蠟液（Reagent G）	15分鐘
xx毫升HEPENGBIO去石蠟液（Reagent G）	15分鐘
xx毫升HEPENGBIO補(bǔ)水液A（Reagent H）	3分鐘
xx毫升HEPENGBIO補(bǔ)水液B（Reagent I）	3分鐘
xx毫升HEPENGBIO補(bǔ)水液C（Reagent J）	3分鐘
xx毫升HEPENGBIO補(bǔ)水液D（Reagent K）	3分鐘

 
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO補(bǔ)水液D（Reagent K）
6． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
7． 室溫下孵育5分鐘
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
 
三、 樣本皂化處理
 
1． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO皂化液（Reagent L），鋪滿整個(gè)樣品表面
2． 室溫下，孵育1小時(shí)（注意：可以延長(zhǎng)至18小時(shí)，避免干枯）
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO皂化液（Reagent L）
4． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
6． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5二次
四、樣本染色處理
1． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO水解液（Reagent M）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
2． 室溫下孵育1小時(shí)（注意：可以延長(zhǎng)至4小時(shí)，避免干枯）
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO水解液（Reagent M）
4． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
6． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5一次
7． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO置換液（Reagent N）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
8． 室溫下孵育15分鐘
9． 小心移去切片上的HEPENGBIO置換液（Reagent N）
10． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
11． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
12． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO染色液（Reagent O），鋪滿整個(gè)切片樣品表面
13． 室溫下孵育1分鐘，或直至呈現(xiàn)黑色
14． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色液（Reagent O） 
15． 小心加上x(chóng)x微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗樣品表面
16． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A） 
 
三、 樣本復(fù)染處理
 
1． （選擇步驟）樣本復(fù)染處理（蘇木素）
2． 放上蓋玻片或水相封片（注意：建議使用HEPENGBIO經(jīng)典水相封片液－ ）
3． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：甘油三酯呈現(xiàn)棕黑色沉淀（如果復(fù)染則細(xì)胞核呈現(xiàn)籃色）