多糖是生物體中廣泛存在的物質(zhì)，是一類由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接而成的天然高分子多聚物，它是生物體內(nèi)重要的生物大分子，是維持生命活動正常運(yùn)轉(zhuǎn)的基本物質(zhì)之一。
利用水提醇沉法提取總多糖，苯酚-硫酸法測定總多糖含量。

自備儀器和用品：

分析天平、酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板、無水乙醇、濃硫酸、蒸餾水、水浴鍋。

操作步驟：

一、總多糖提取
樣本烘干粉碎，稱取約 0.05g 樣本，加入 1mL 水，充分勻漿。100℃水浴提取 2h（必須蓋緊蓋子防止水分流失），冷卻后 10000g 離心 10min，取上清。吸取 0.2mL 上清，慢慢加入 0.8mL 無水乙醇，混勻后 4℃靜置過夜，10000g 離心 10min，棄上清，沉淀中加入 1mL 水，充分混勻溶解沉淀。

二、測定步驟

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 490nm。
2 、稱 1mg 標(biāo)準(zhǔn)品用 1mL 蒸餾水溶解， 濃度為 1mg/mL 。取適當(dāng)溶液配制濃度為1mg/mL 、
0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品（蒸餾水進(jìn)行稀釋）。取 1.5mL EP 管吸取 200μL 標(biāo)準(zhǔn)品，加入 100μL 試劑一和 0.5mL 濃硫酸，混勻后 90℃水浴 20min，流水冷卻。取200μL 加入酶標(biāo)板，于 490nm 下測定吸光值A(chǔ)。根據(jù)吸光度（x）和濃度（y，mg/mL） 做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3、吸取 200μL 上清，加入 100μL 試劑一和 0.5mL 濃硫酸，混勻后 90℃水浴 20min，流水冷卻。取 200μL 加入酶標(biāo)板，于 490nm 下測定吸光值 A。

三、總多糖含量計算

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品△A 帶入公式中（x），計算出樣品濃度 y（mg/mL）。
（1） 按樣本鮮重計算
總多糖（mg /g 干重）=5y÷W
V 樣總：上清液總體積，mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；W：樣品質(zhì)量，g ；樣本體積已被稀釋五倍，T。
注意事項：
1.如果樣品吸光值A(chǔ) 大于 最大濃度標(biāo)準(zhǔn)品吸光值，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計算公式中再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
2.由于濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，請謹(jǐn)慎操作